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INSEMINAÇÃO ARTIFICIAL EM CÃES
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i) História
Um hitórico completo de criação é essencial para avaliar o
cachorro reprodutor para a procriação. Em particular ,
analisa-se uma freqüência e número de vezes por tempo de
unidade e uma fecundidade aparente deste. Devem ser avaliados Brucella
canis titers para ambos os cães de procriação. Como com
qualquer exame masculino, um exame físico completo é essencial
para o animal.
ii) exame Físico
Apalpe uma envoltura do pênis que assegure que externamente não
há massa ou adesões. Exteriorize então o pênis não-ereto e
assegure que a mucosa deste não tem nenhuma lesão significante
superficialmente. Um exemplo de uma lesão importante seria um
pedunculado vermelho, massa cancerosa que tem uma probabilidade
de ser um tumor venéreo transmissível (TVT). Também, enquanto
o pênis está exteriorizado e não-ereto , examine o pênis
integralmente. Examinado e tendo a genitália externa
completamente exposta,poderá ser feito uma palpação retal
final.
Quando acondicionando o sêmen de cachorro reprodutor, é
essencial se lembrar de vários fatores. Primeiramente, o pênis
de cachorro é um pênis moderadamente frágil. Um pênis
excessivamente pequeno ou defeituoso em cachorros limitarão uma
capacidade destes como cachorros para reprodução. É essencial
identificar e reconhecer a importância das glandes do bulbo. As
glandes do bulbo estão na porção proximal do pênis e é capaz
de engorgitar até 2 a 3 vezes seu tamanho durante a ereção. As
glandes dos bulbos não fazem o engorgitamento normalmente até a
penetração estar completa. Momento que, uma expansão de
glandes dos bulbos dentro da vulva e como contrações musculares
da vulva permitem a formação da fechadura genital.
O cachorro tendo estabelecido uma vez a fechadura genital , ele
virará tal que os dois cachorros vêm se levantar para a
posição posterior. Isto é facilitado pela porção
fibroelastica proximal do pênis das glandes do bulbo que pode
girar 180o num eixo horizontal. Enquanto for acondicionando o
sêmen do cachorro ele pisará freqüentemente em cima de sua
mão para formar a posição normal e a pessoa encarregada não
deveria tentar mover o pênis em qualquer forma de arco ventral.
O movimento natural é uma rotaçào de 180o do pênis em um
movimento horizontal (paralelo à coluna espinal).
Exames de fertilidade presentes procuram anormalidades primárias
e secundárias como indicadores de fertilidade do esperma.
Anormalidades primárias são anomalias que acontecem como
resultado de defeitos no epitélio germinal. Eles acontecem
quando a espermatogônia se desenvolve em espermatides
(espermatocytogenesis). Anormalidades secundárias acontecem
quando espermátides amadurecem em espermatozoa (espermiogênese)
ou depois da ejaculação. A classificação de espermas é
dividida em classificações morfológicas primárias e
secundárias. Estas foram permanecidas em anormalidades
principais e secundárias, respectivamente, mais recentemente ,e
isto está baseado na fertilidade, ou mais justamente, na falta
de fertilidade, para um defeito específico.
Raramente uma vagina
artificial (VA) é usada nas coletas de hoje. O método preferido
hoje é a luva e o cone de borracha de látex . É essencial
manter a esterilidade. Todo o equipamento utilizado deveria ser
adequadamente esterilizado em gás ou calor. Na maioria dos
casos, todos os artigos de látex deveriam ser esterilizados em
gás (óxido de ethyleno) e subseqüentemente arejados durante
pelo menos 2 a 3 semanas.
É freqüentemente
possível coletar sêmen de um cachorro sem uma cadela em estros
presente. Porém, uma qualidade mais alta do ejaculado é obtido
se uma cadela em estros está presente. Se uma cadela em estros
está sendo usada, uma cadela de tamanho semelhante e
temperamento plano deveria ser usada. É essencial controlar de
perto e monitorar os dois cachorros a toda hora. Se uma cadela em
estros não está disponível , pincele descargas de muco estral
de uma cadela em estros que é negativo de Brucella. Estes podem
ser armazenados no congelador em bolsas de zip-lock até ser
requerido.
Se uma cadela em estro está presente, permita que dois cachorros
se toquem em um período breve anterior à coleta. Se você é
destro, ajoelhe na esquerda do cachorro para manipular o pênis
com sua mão direita. Permita que o cachorro cheire a cadela e
pegue a parte caudal do pênis para o bulbo das glandes , depois
de refletir a envoltura.
O pênis é dirigido no cone de VA que é segurado na mão
esquerda. Uma pressão gentil ao redor da base do bulbo das
glandes assegura ereção completa e normalmente é associado com
vários graus de vigor. Se uma cadela não está disponível, é
possível masturbar o cachorro. Retrate totalmente a envoltura
caudal do pênis para o bulbo das glandes enquanto se masturba.
Nós recomendamos que a envoltura, durante qualquer coleção,
seja deslocada completamente para cima da seta do pênis.
Masturbando os bulbos continuamente ao ponto que o pênis começa
a inchar e o cachorro parece mostrar, empurrando-o em movimentos.
Normalmente, após estes protocolos serem seguidos, a
ejaculação começará.
Coleção de sêmen pobre e avaliação resultam freqüentemente
em uma diagnose imprópria de infertilidade. O cachorro
reprodutor deveria ser estimulado com uma cadela em estro,
especialmente uma virgem jovem. Os cachorros jovens são
freqüentemente inseguros do que é esperado e isto faz com que a
coleta seja difícil. Cachorro adultos experientes também são
freqüentemente difíceis de coletar a menos que adequadamente
estimulasse por uma cadela em estros. Todos nós reconhecemos o
fato que a acessibilidade para uma cadela em estro justamente
quando você precisa é difícil e freqüentemente impossível. O
uso de esponjas de gaze empapadas em secreções de estros e
geladas em bolsas de ziplock é recomendado. A coleta em machos
de baixo libido é até mesmo difícil na presença de cadelas em
estro e isto não pressagia bem para a fertilidade deles.
O processo de coleção é simples e efetivo se executado
corretamente. Prepare com antecedência tendo a vagina artificial
(VA) cone e tubo de coleção (esquentado) pronto. Os materiais
de vidraria e pipetas também devem ser pré-aquecidos.
A masturbação e coleta é
executada melhor com sua mão de escritura. Coloque no lado
apropriado o cachorro. A masturbação começa com movimento
cranio-caudais de envoltura em cima da glande do bulbo do pênis.
A quantia de pressão é variável e o melhor é começar com
suavidade e aumentar a pressão.
O processo de coleção do sêmen é aumentado freqüentemente
pulsando-se e apertando ao redor da base da glande do bulbo.
São ejaculadas algumas
gotas de fração de pré-esperma clara primeiro e o fluido é
derivado das glândulas uretrais. Isto é seguido pela fração
de esperma branca cujo volume pode percorrer de 0.1 a 3.0 ml. É
durante esta fase que a fração mais vigorosa acontece. É
essencial proteger o tubo durante a coleção de sêmen.
Mantendo-se primeiramente na mão da pessoa mantém o tubo de
teste morno e previne o choque frio. Secundariamente, a mão
também protege o esperma dos efeitos extremamente prejudiciais
de luz ultravioleta. A pessoa tem que se lembrar de girar o
pênis em uma posição horizontal até que este é dirigido
caudalmente. Se é mantida pressão dorso-ventral ao redor da
glandes do bulbo, a ejaculação pode ser monitorada por
palpações do aspecto ventral do pênis à uretra. Também é
possível observar as contrações rítmicas do ânus.
O terço e fração final do ejaculado é a fração prostática.
Esta fração pode variar em volume de 1 a 20 ml e pode depender
do protocolo de coleção. Não há nenhuma glândula seminal no
cachorro e assim eles não têm nenhuma fructose no ejaculado.
Depois que a coleção fosse completada, é essencial assegurar
que o pênis é re-embainhado dentro do prepúcio. Se a envoltura
não for colocada caudalmente para a glande doe bulbo, este é um
procedimento relativamente simples. O processo de ejaculação
total pode durar de 3 a 45 minutos e o volume total pode variar
de 1 a 40 cc. Normalmente, só uma porção do tamanho principal
deste fluido, fluido prostático, é usada para diluir o sêmen
para inseminação.
Devem ser avaliados vários parâmetros quando acondicionando
sêmen. O volume é avaliado acondicionando o sêmen em tubos de
teste graduados. A cor do sêmen de cachorro normalmente é
branca a um opalescente. Amarelo regularmente indica
contaminação com urina que é tóxico a esperma e pode ser
observado sangue como uma cor vermelha para o sêmen.
O pré-esperma e esperma são colecionadas. A prostática
(terceira) é colecionada separadamente por um segundo tubo
esquentado. Freqüentemente durante este processo o cachorro
tenta inverter a posição dele e completar a gravata (posição
em que o macho fica com a fêmea na cópula). Isto é ajudado
girando o lateralmente de pênis (não ventralmente).
O sêmen deve ser colecionado debaixo de ótimas condições e
deve ser protegido de mudanças em temperatura e luz. A
motilidade da célula de esperma é diminuído na presença de
temperaturas menores que 30oC e luz ultravioleta. O sêmen deve,
imediatamente em coleção, ser avaliado para cor, volume e
consistência. A cor normal de sêmen é um branco para branco de
opalescente. Se o sêmen normalmente é amarelo que isto denota
contaminação com urina que é espermicida e diminuirá a
motilidade. Se o sêmen é vermelho que isto é indicação de
hemospermia . A hemorragia é induzida freqüentemente durante
coleções rotineiras com a ruptura de vasos. Sêmen verde ou
amarelado-verde normalmente denota a presença de neutrofilos e
é associado com uma infecção.
Microscopicamente o sêmen deve ser avaliado para motilidade,
morfologia e outros contaminantes celulares. Examinar a
motilidade da célula de esperma é essencial que o evaluador use
vidrarias e aparelhos que mantenham uma temperatura de 37C.
I. Motilidade bruta
Inicialmente, a motilidade bruta a aumento de 10 x é avaliada
colocando-se uma gota de esperma na lâmina. Sêmen normal
deveria ter 70 a 80% de motilidade. A motilidade bruto é marcado
em uma escala de 0 a 5. Absolutamente nenhum movimento de célula
de esperma é marcado como um zero, enquanto rodando é marcado
como uns 5.. É freqüentemente mais prudente marcar movendo
rapidamente, embora não rodando, sêmen como uns 5.
II. Motilidade individual
A motilidade individual é avaliada ao aumento de 40 X. Uma
lâmínula é colocada em cima da gota de sêmen. A motilidade
individual também é marcado em uma escala de 0 a 5. Em um
aumento de 40 X a motilidade do esperma individual permite
avaliar vários parâmetros. Primeiro, a motilidade da célula de
esperma individual é avaliado. As células de esperma devem ser
avaliadas para a taxa de motilidade dianteiro, progressivo e
linear. Se lembre que as células de esperma com rabos
anormalmente dobrados estão nadando freqüentemente para trás e
isto pode ser determinado avaliando o esperma criticamente na
orientação de cabeça. Motilidade extremamente boa (5/5) é
quando os espermatozóides atravessam o campo de visão. Esperma
normal deveria exibir movimento dianteiro, progressivo e deveria
marcar 2.5 a 5 (0-5).
III. Por cento vivo
O por cento vivo da população da célula de esperma também
pode ser determinado com o aumento de 40 x contando 10 células
de esperma e determinando o número da células de esperma de
motilidade. Este procedimento é repetido 4 a 5 vezes e a média
é determinada. A motilidade e por centagem de vivos são
considerações importantes quando a dose de inseminação para a
cadela é calculada.
IV. Concentração de
sêmen
É essencial determinar os números de esperma, concentração,
dentro um ejaculado. Um número normal da células de esperma que
o animal descansado ejacule considerado é >500 milhões de
células. Menos de 100 milhões de células totais foram
associadas com infertilidade. Para inseminação artificial um
mínimo de 400 x 106 normal, são precisadas. No caso de sêmen
congelado >400 milhões são requeridas .
A pesquisa mostrou que a cadela deveria ser inseminada no
primeiro 5 d de estro, como os dias posteriores (> 6
ovulação de posto) teve transporte de esperma extremamente
pobre.
V. Morfologia
Morfologia
é avaliada fazendo um deslizamento de eosin-nigrosin. O
deslizamento é observado então debaixo de óleo ( ampliação
de 100 x). Normalmente são requeridas 80% celulas normais, mas
há relatórios de 87 a 92% anormal e foram informados
espermatozóides em cachorros férteis.
A eosina é uma tintura vital e é excluído da células ao vivo
com membranas de plasma não danificadas. No caso da células com
membranas danificadas as células mancham de vermelho.
Normalmente estas células mortas ou agonizantes danificaram
membranas de plasma e estas células mancham de vermelho.
Morfologia da célula de esperma deve ser avaliada com uma lente
de imersão de óleo. A morfologia da célula de esperma é
subdividida em três grupos. Células de esperma normais,
principal (primário) e secundário (secundário) em
anormalidades. Um ejaculado normal tem mais que 80%
morfologicamente em esperma normal. Ejaculado consistindo em 20 a
40% de anormalidade (primário) da células de esperma foram
associadas com concepção diminuída, enquanto maior que 40%
anormalidade (primário) foi associado com infertilidade.
Se lembre que nós temos que proteger o cachorro reprodutor e a
cadela. Assim uma pobre ou uma técnica incompleta pode pôr um
ou ambos sócios do esquema reprodutivo em perigo. Segue uma
lista de conferição sumária para um exame completo:
1] excitação adequada para coletar uma prova de sêmen correta
2] técnica de coleção correta (todo o sêmen protegido do
resfriamento e choque ultravioleta)
3] técnica de avaliação completa:
a] Volume, cor e consistência
b] Motilidade
1. Motilidade bruta em aumento de 20x
2. Avaliação da célula individual em aumento de 40x
3. Avalie a % de vivos à uma ampliação de 40x
c] Morfologia com uma coloração de eosina-nigrosina a 100 x
(lente de óleo). Conte 100 células e determine a porcentagem de
células de esperma normais.
d] Cultura do sêmen, fluido prostático e urina para:
1. Aerobiose
2. Anaerobiose
3. Mycoplasma/ureaplasma
4. Fungo
f] Concentração espermática
Devem ser
associados todos os exames do animal com um exame físico
completo i.e. um exame completo da área reprodutiva interna e
externa. Se nós fazemos estes exames, nós monitoraremos os
parâmetros reprodutivos dos animais mais eficazmente. Nós
devemos assegurar uma padronização da avaliação do cachorro
reprodutor para proteger o valioso material genético armazenado
nas linhas de procriação.
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